结果为阴性。

　　异常结果：

　　1.被检血清凝集滴度低于抗原对照4倍两孔或4倍以上为阳性。恢复期血清抗原滴度比急性期高4倍或4倍以上判为阳性。

　　2. 有特殊显色反应，证明有某种蛋白质存在。

　　3. 待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1，而且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性。

　　需要检查人群：消化道溃疡患者。

　　检查前禁忌：注意保护好脑部;准备好各种包装液，并配置好浓度。

　　检查时禁忌：

　　1.患者取脑脊液坐好，以免弄伤头部。

　　2.所用单克隆抗体致敏羊血红细胞要冻干才使用。

　　3.一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定较好条件。

　　4.显色液必须新鲜配置使用，最后加入H2O2。

　　5.DAB有致癌的潜在可能，操作时要小心仔细。

　　6.严格控制影响标记效率的因素如温度、时间、pH、酶和抗体量等。

　　7.装层析柱时要使柱体均匀、柱面平整，无气泡、裂隙。

　　一、被动血凝测定

　　患者刺取脑脊液，采用稀释抗原固定血清法用96孔V型微量血凝板，将乙脑抗原作倍比稀释，使每孔含25uL, 被检血清用稀释液作1：10稀释，每孔加人25uL，再滴加冻干乙脑单克隆抗体致敏羊血红细胞25uL，37℃下放置数小时后观察结果。

　　二、免疫印迹技术

　　(一)蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000g离心15min。取上清液作为样品。

　　(二)电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。

　　(三)转移：(半干式转移)

　　1、电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平衡，5min×3次。

　　2、膜处理：预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜，浸入转膜缓冲液中10min。

　　3、转膜：转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、NC膜精确对齐，每一步去除气泡，上压500g重物，将碳板上多余的液体吸干。接通电源,恒流1mA/cm2，转移1.5hr。转移结束后，断开电源将膜取出,割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色，放入膜染色液中50s后，在50%甲醇中多次脱色，至背景清晰，然后用双蒸水洗，风干夹于两层滤纸中保存，留与显色结果作对比。

　　(四)免疫反应：

　　1、用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。

　　2、加入包被液，平稳摇动，室温2hr。

　　3、弃包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。

　　4、加入一抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释，液体必须覆盖膜的全部)，4℃ 放置12hr以上。阴性对照，以1%BSA取代一抗，其余步骤与实验组相同。

　　5、弃一抗和1%BSA，用0.01M PBS分别洗膜，5min×4次。

　　6、加入辣根过氧化物酶偶联的二抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释)，平稳摇动，室温2hr。

　　7、弃二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。

　　8、加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。

　　三、酶联合吸附测定

　　常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。

　　1.间接ELISA

　　本法主要用于检测抗体。间接ELISA的操作程序如下。

　　(1) 材料

　　① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液;

　　② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清;

　　③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。

　　(2) 方法步骤

　　① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干;

　　② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干;

　　③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干;

　　④ 加底物液　→ 37℃ 30分钟，加终止液;

　　⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。

　　2.双抗体夹心ELISA

　　本法主要用于检测大分子抗原。

　　① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干;

　　② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干;

　　③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干;

　　④ 加底物液　→ 37℃ 15分钟，加终止液;

　　⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

　　不适宜检查人群：无。

　　无相关并发症和危害。